液相色谱（LC）分析定量与方***证的完善

一旦完成了液相色谱仪检测方法建立，应对其进行论证，进行***论证通常需通过简略核查方法的专属性、线性、准确性、精密度、回收率、灵敏度等而实施。在***终论证方法之前，应准备和检查书面分析方案，使之清晰、严密。实际的论证程序按方法的重要性不同，需时为1天一2周不等。理想的情况是，通过方***证能找出可能因仪器和操作者的不同而导致的潜在问题。

在日常HPLC分析中，柱间重现性可能是主要问题之一。同种方法在不同批号的色谱柱上可能有不同的结果，任何意外的结果都应进行研究，以找出其原因，避免在日后的工作中出现同类错误。

   完善方法

1. 应预备数据表明所需方法的性能；

2. 应有为其它操作者使用的书面分析步骤；

3. 以一个以上的系统或操作者，用包括期望组分和期望被测物浓度的样品 系统地论证方法的性能；比较不同时间和不同实验室之间的实验数据；

 4. 应得到色谱柱的期望寿命以及柱间重现性的数据；

 5. 研究不正常的结果，以纠正潜在的问题；

6. 研究所有影响分离的条件（温度、流动相组成、pH等）；

规定这些条件的限度；对可能发生的问题（关键谱峰对分离不足；随运行时间延长，***末谱峰保留值增加等）提出建议措施。

这些条件的要求适用于满足精密准确、稳定可靠并可移植转让的严格HPLC标准方法。在其它情况下，可能只要求一次成功的分离或能快速、“粗略”地答复某一特定问题，此时可部分许多建议，仅明白并知道一个方法建立方案的真实目标就足够了。

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